技術分享 | 細胞培養技巧之細胞傳代

 

細胞傳代是細胞培養中非常重要的一個步驟，用于維持和擴增特定細胞系的數量。細胞傳代的目的是保持細胞的健康狀態、避免細胞老化和突變，并保證細胞的穩定性和一致性。

 
細胞代傳
 

貼壁細胞傳代

 

培養器皿選擇：選擇適合貼壁細胞傳代的培養器皿，確保器皿表面干凈、無菌。

 

細胞密度控制：根據細胞生長情況，控制細胞的密度。通常在細胞生長至80%～90%的密度時，適合進行傳代。

 

細胞分離：使用胰蛋白酶等消化酶對細胞進行消化，以將細胞從培養器皿表面分離。消化時間和酶的濃度應根據細胞類型來確定。

 

細胞計數：對細胞進行計數，以確定傳代時需要接種的細胞數量。

 

細胞離心：將細胞培養液進行離心，以沉淀細胞。離心速度和時間應根據細胞類型來確定。

 

細胞接種：去上清，加適量新鮮完全培養液吹打重懸細胞。然后轉移適量細胞懸液至新培養瓶中，再加入一定量完全培養液，輕輕搖晃培養器皿，使細胞均勻分布。

 

培養條件：將培養器皿放置二氧化碳培養箱中，并提供適當的培養條件，如溫度、濕度和CO2濃度。遵循細胞系的特定培養條件，以確保其正常生長和增殖。

 

懸浮細胞傳代

 

細胞密度控制：根據細胞生長情況，控制細胞的密度。通常在細胞生長至80%～90%的密度時，適合進行傳代。

 

細胞計數：對細胞進行計數，以確定傳代時需要接種的細胞數量。

 

細胞離心：將細胞培養液進行離心，以沉淀細胞。離心速度和時間應根據細胞類型來確定。

 

培養基的更換：去除營養匱乏的舊培養液，用新的培養基代替?？梢允褂脽o菌的吸管或移液器謹慎地進行操作，避免對細胞造成機械性損傷。

 

細胞接種：將沉淀的細胞重新懸浮在新的培養基中，并將其接種到新的培養器皿中。根據細胞類型和實驗要求，調整細胞密度和培養基的體積。接種后，輕輕搖晃培養器皿，使細胞均勻分布。

 

培養條件：將培養器皿放回恒溫培養箱中，并提供適當的培養條件，如溫度、濕度和CO2濃度。遵循細胞系的特定培養條件，以確保其正常生長和增殖。

 

細胞傳代培養注意事項

 

1.在吹打過程中，不要將移液管中的液體全部排出，同時要控制吹打節奏，以避免吹出泡沫。泡沫會對細胞造成損傷，并且難以在顯微鏡下觀察到是否所有細胞都被吹打下來。

 

2.不要等待貼壁細胞完全鋪滿培養皿或培養瓶，因為這可能會導致細胞生長緩慢或死亡。

 

3.對細胞進行消化時，最好不要等到細胞成片飄起，否則會影響細胞狀態，并且第二天培養中會出現較多的死細胞。